Quy trình này được dùng để chẩn đoán virus Tilapia Lake (TiLV) trong các mô của cá rô phi bằng cách ứng dụng kỹ thuật RT-PCR. Toàn bộ quy trình sẽ được mô tả từ bước lấy mẫu mô đến bước tách chiết RNA tổng số, tiếp theo là tổng hợp cDNA và phát hiện TiLV bằng phương pháp PCR thông thường hoặc PCR định lượng bằng cách sử dụng thuốc nhuộm liên kết huỳnh quang.
Nội dung
Mục đích nghiên cứu
Mục đích của nghiên cứu này là ứng dụng kỹ thuật RT-PCR và RT-qPCR với SYBR Green để phát triển ra một quy trình phát hiện nhanh chóng, nhạy và đặc hiệu virus Tilapia Lake (TiLV) trong các mô của cá rô phi.
Ứng dụng của nghiên cứu
Quy trình này có thể được sử dụng trong các chương trình giám sát bệnh, các chương trình đo đạc mức độ an toàn sinh học và trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu cơ bản về TiLV.
Vì sao nên ứng dụng kỹ thuật RT-PCR và RT-qPCR?
Quy trình “tiêu chuẩn vàng” về chẩn đoán virus thường bao gồm phân lập virus, sau đó sử dụng các kỹ thuật bổ bổ trợ như phản ứng chuỗi polymerase kết hợp phản ứng phiên mã ngược (RT-PCR) để xác nhận kết quả. Tuy nhiên, quy trình này thường lích kích, tốn thời gian và thường đòi hỏi các mẫu mô bị nhiễm virus nặng.
Sử dụng kỹ thuật RT-PCR định lượng (RT-qPCR) trong phát hiện virus sẽ mang lại nhiều lợi điểm như:
- Cho phép định lượng
- Độ nhạy cao
- Độ đặc hiệu cao
- Khả năng tăng công suất
- Thời gian trả kết quả ngắn
Ở đây, toàn bộ phương pháp tiếp cận dựa trên PCR để phát hiện TiLV được mô tả đầy đủ, bao gồm 5 bước:
- Thu mẫu cơ quan cá rô phi
- Tách chiết RNA tổng số bằng cách sử dụng dung dịch guanidium thiocyanate-phenol-chloroform
- Định lượng RNA bằng máy NanoDrop,
- Tổng hợp cDNA
- Phát hiện cDNA TiLV bằng phương pháp PCR thông thường hoặc định lượng thông qua qPCR bằng cách sử dụng thuốc nhuộm SYBR Green.
Khi ứng dụng kỹ thuật RT-PCR thông thường sẽ đòi hỏi các bước thao tác sau PCR như điện di và chỉ cho biết về sự hiện diện của virus.
Cách tiếp cận thứ hai, sử dụng kỹ thuật RT-qPCR, sẽ cho phép định lượng tuyệt đối TiLV xuống chỉ còn 2 bản sao. Do đó, sẽ giúp ích rất nhiều cho chẩn đoán TiLV trong các trường hợp cận lâm sàng.
Download bài Fulltext tại đây: 
Video cũng mô tả chi tiết về hai phương pháp PCR, kết quả đại diện từ hai phòng thí nghiệm và thảo luận kỹ lưỡng về các thông số quan trọng. Video sẽ giúp các nhà nghiên cứu và chẩn đoán tìm ra phương pháp phát hiện TiLV phù hợp nhất cho họ.
HƯỚNG DẪN BẬT PHỤ ĐỀ TRONG KHI XEM VIDEO: Bấm vào nút “CC” ở dưới video, chọn English.
ĐĂNG KÝ THÀNH VIÊN ĐỂ NHẬN ĐƯỢC THÔNG BÁO VỀ CÁC BÀI VIẾT MỚI NHẤT: ĐĂNG KÝ TẠI ĐÂY
Nội dung bài viết được tham khảo từ JoVE, dịch và chỉnh sửa bởi sinhhocphantu.net.
14,790 total views, 1 views today
